小鼠皮下成瘤是生物医学研究中非常经典的一个实验，操作并不复杂，但由于实验周期相对较长，动物模型个体差异大，遇到的问题往往也较多。今天我们就集中看下小鼠成瘤实验中经常遇到哪些问题吧！

Q1：小鼠皮下成瘤形成的瘤体应该是什么颜色？我的小鼠形成的瘤体是白色，我看别人的好像都是红色，这样算是失败了吗？

A1：瘤体是白色还是红色，和肿瘤细胞类型、肿瘤中含血量、肿瘤细胞代谢等因素有关。小鼠皮下成瘤形成的瘤体，颜色越红，通常说明肿瘤血供越丰富，生长越活跃；颜色过暗，则可能提示内部有坏死；一些上皮来源的癌（如乳腺癌、肺癌的皮下转移瘤）或细胞密度极高的肿瘤，可能呈现粉白色或肉色；而在细胞密度高且血供相对较少的区域，瘤体可能呈灰白色。因此瘤体的颜色并不能断定成瘤失败与否，具体还要靠进一步的检测。

Q2：加基质胶后形成的瘤体会影响后续蛋白检测跑WB吗？

A2：不会。基质胶的主要成分：层粘连蛋白（约220 kD）、IV型胶原（160-190 kD）、硫酸乙酰肝素蛋白多糖（150-250 kD）和巢蛋白（约150 kD）。这些成分主要集中在大于150 kD的高分子量区域，对大多数目标蛋白（30-100 kD）无直接影响。

Q3： 我发现我用基质胶成瘤跟之前做的形态相比不太一样，用基质胶成瘤会更圆更匀吗？这是正常的吗？

图 不使用基质胶与使用基质胶成瘤结果对比（图源：Influence of Matrigel on Single- and Multiple-Spheroid Cultures in Breast Cancer Research）

A3：使用基质胶进行皮下成瘤实验，通常确实会导致形成的瘤体更圆、更规则、更匀称。

这主要是由基质胶的物理和生物学特性决定的：它通过物理禁锢作用给肿瘤生长定了一个“圆形的模子”，同时又通过提供均匀的营养和血管支持，保证了肿瘤能够匀称地“长满这个模子”。比如，像MDA-MB-231细胞，加有基质胶比无基质胶在形成的肿瘤球形状上就会更圆更规则（如上图所示）。

Q4：扎瘤之前十几分钟才把基质胶和细胞悬液混合，可以吗？

A4：这是正常操作，没有问题的。可以提前十几分钟把基质胶和细胞悬液混合，混匀后需要放在冰上。过早混合会导致严重问题，基质胶在4℃左右保持液态，但在遇到37℃的体温时会迅速聚合，形成不可逆的凝胶。建议从混合到注射完成的总时间最好控制在30分钟以内，并且确保这段时间内混合物始终在冰上。时间越长，细胞在无营养的基质胶中存活率可能会略有下降，同时也增加了意外凝胶化的风险。

Q5：我的成瘤实验过了一周还没成瘤，是不是失败了呢？通常几天能够成瘤呢？

A5：一般1-2周，成瘤比较快的像MC38可能仅需要1周，9-10天瘤体就可以达到100 mm³ ；成瘤慢一些的像HepG 2需要1-2周，2–3周瘤体达到100 mm³。具体时间因细胞类型、接种条件和实验目的而异。可以再观察一周看看，不必过于担心。

小鼠成瘤实验要想成功，除了适宜的实验条件和正确的实验操作，基质胶的选择也至关重要。

Arcegel Matrix High Concentration，LDEV-Free基质胶（CAT#C231005），从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取，能够模拟体内细胞基底膜的结构、组成、物理特性和功能，有利于体外细胞的培养和分化。本产品为无菌制品，浓度大于18 mg/mL，由于其高浓度和快速成胶的特点，能够迅速在实验部位形成稳定的支架结构，为肿瘤的细胞生长提供良好的环境，特别适用于体内成瘤实验。

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